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細胞消化的方法有什么

 更新時間:2024-01-26 點擊量:399
  細胞消化的方法有什么
  在貼壁細胞傳代前必需將細胞與貼附介質(zhì)分離,常見的方式就是通過胰蛋白酶對細胞進行消化。那么你知道細胞消化的方法有哪些嗎?讓我們一起來看看吧!
  一、機械消化法
  直接用液體吹打或用刮刀,施予外力讓細胞與培養(yǎng)底物分離;適用于貼壁性弱的細胞傳代,但相較于其它消化方法,這種外力無法量化控制,細胞分散效果差,且可能會造成大量細胞破損,使內(nèi)容物釋放到培養(yǎng)基,進而影響細胞傳代狀態(tài)。
  二、離子螯合法
  細胞膜表面蛋白大多需要鈣、鎂離子來維持與胞外基質(zhì)的穩(wěn)定鍵結(jié),當然也包含各種黏附蛋白(例:整合素、鈣黏著蛋白、橋粒等),螯合劑會在不破壞細胞膜表面蛋白的狀況下,抽離這些離子,使黏附蛋白失活而減少細胞-細胞間及細胞-底物間的連接作用,讓細胞較容易在施予外力時,脫離培養(yǎng)底物并促進細胞分散。
  0.02%EDTA是細胞傳代常用的離子螯合劑,在37℃作用效果佳(消化較敏感的細胞可在4℃作用),適用于消化一般貼壁性細胞或細胞表面標記實驗細胞。但EDTA無法用血清終止其反應,所以在消化細胞后必須用緩沖鹽溶液(如:PBS)清洗離心,以免影響后續(xù)細胞貼盤效果。
  三、酶消化法
  用蛋白水解酶消化連接細胞及培養(yǎng)底物的蛋白質(zhì),適用于消化貼壁性稍強的細胞。
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