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Elabscience生物素標(biāo)記試劑盒怎么用?

 更新時間:2023-12-27 點擊量:737

Elabscience生物素標(biāo)記試劑盒提供了標(biāo)記所需的全部試劑,能簡單有效地對含有伯氨基(-NH2)分子的蛋白標(biāo)記。那么你知道Elabscience生物素標(biāo)記試劑盒怎么用嗎?讓我們一起來看看吧!

一、實驗物品

1. 高精度移液器及一次性吸頭:0.5-10 μL、2-20 μL、20-200 μL、200-1000 μL

2. 37°C 恒溫箱

3. 離心機(jī)(離心力可到 12000×g)

二、操作

1. 實驗前準(zhǔn)備

(1)試劑耗材準(zhǔn)備:提前 20 min 從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫(注:不需要用到的試劑組分繼續(xù)放置在冰箱中)。

(2)超濾管浸潤:向干燥的超濾管濾芯中加入 500 μL Labeling Buffer I,室溫放置 10 min 備用,在加入待標(biāo)記物之前棄去 Labeling Buffer I 即可(整個標(biāo)記過程中超濾管濾芯都應(yīng)該保持濕潤)。

(3)溶解 NHS-Biotin:用 30 μL DMF 溶解 0.1 mg NHS-Biotin,靜置 10 min,待其充分溶解,此時 NHS-Biotin 的濃度為 10 mM,蓋好管子備用。

2.標(biāo)記流程

圖片1.png

3. 標(biāo)記步驟(本操作步驟按照 1 mg 蛋白的量進(jìn)行標(biāo)記)

(1)濃縮換液:將 Filter device 正置于配套 Collection tube 里,取 1 mg 待標(biāo)記蛋白加入 Filter device 中,并用 Labeling Buffer I 補(bǔ)充總體積到0.5 mL,蓋好 Filter tube,以 12000×g 的轉(zhuǎn)速離心 10 min,棄去Collection tube 中的液體。

注:

a) Filter device 的最大容積為 0.5 mL。

b) 如果1 mg蛋白體積大于0.5 mL,請分多次加入,離心超濾濃縮。

c) 如果待標(biāo)記物中含有游離的氨基(Tris,氨基酸或者其他干擾物,需要用 Labeling Buffer I 反復(fù)超濾確保其去除干凈)。

(2)回收定量:將Filter device倒置于配套Collection tube里,1000×g離心2 min,回收濃縮換液后的蛋白,取出 Filter device,向Collection tube 中加入適量 Labeling Buffer I至蛋白濃度約為2 mg/mL,同時在Filter device中加入0.5 mL Labeling Buffer I,置于管架上備用。

(3)標(biāo)記反應(yīng):立即向蛋白溶液中加入 26.6 μL 的 10 mM NHS-Biotin,輕輕吹打混勻,蓋上蓋子密封,放入 37°C 恒溫箱中避光溫育 30 min。

(4)封閉終止:按比例每 100 μg 蛋白加入 10 μL 的 1 M Tris(pH 8.7),混勻后室溫放置 10 min。

(5)超濾純化:加入適量的1×PBS至上述反應(yīng)液中,使終體積為0.5mL,輕輕吹打混勻,將反應(yīng)溶液轉(zhuǎn)移至甩干的 Filter device(若上述反應(yīng)液已超過 0.5 mL,可超濾后分多次轉(zhuǎn)移至甩干的 Filter device中),并與 Collection tube 配套后蓋好 Filtration tube,12000× g的轉(zhuǎn)速離心 10 min~30 min。后棄去 Collection tube 中液體,向Filter device中補(bǔ)足1×PBS至500 μL,重復(fù)離心超濾操作2~3 次。

(6)收集產(chǎn)物:加 0.2 mL 1×PBS至Filter device 中,輕輕吹打。將 Filter device 倒置于另一個 Collection tube中,1000×g 離心 2 min。收集Collection tube 中的溶液,即為生物素標(biāo)記的蛋白。

3. 蛋白保存及使用

向標(biāo)記后的蛋白中加入0.05~0.2% Proclin 300或0.05%die氮化鈉,及蛋白穩(wěn)定劑(如 0.1% BSA),于2~8°C 避光保存,可穩(wěn)定保存半年?;蚣尤氲润w積甘油于-20°C 存儲,可穩(wěn)定保存半年。

更多有關(guān)Elabscience生物素標(biāo)記試劑盒的使用方法,請聯(lián)系Elabscience試劑盒代理——北京百奧創(chuàng)新科技有限公司。



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