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病毒載體在親和層析填料上的新選擇

 更新時間:2023-03-01 點擊量:1037

親和層析填料是利用生物分子間所具有的專一性親和力而設(shè)計的層析技術(shù),常用于從復(fù)雜性高、難度大的進(jìn)料流中捕獲目標(biāo)產(chǎn)物,是純化病毒載體的理性型。但是,病毒載體純化對親和層析填料的要求也非常高,主要是由于病毒載體的滴度低、雜質(zhì)水平高、敏感性強(qiáng)、粒徑可變性大,這都給選擇哪種親和層析填料帶來了不小的難度,包括層析基質(zhì)(填料/整體柱/膜/纖維)和配基的選擇難度也不小。


一、病毒載體純化在親和層析填料選擇上的“攔路虎"

1.病毒載體的敏感性性強(qiáng)

在強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、高鹽、低鹽、高剪切等環(huán)境條件下,病毒載體高度敏感,這對親和層析填料的配基的選擇帶來了難度。親和層析填料的配基跟目標(biāo)病毒載體良好結(jié)合后,在相對溫和的洗脫條件下,才可能避免在純化過程中病毒顆粒由于PH的變化所導(dǎo)致的感染性喪失的問題。

2. 病毒載體的粒徑可變性大

病毒載體的類型不同,大小也不相同,一般大小在20 到 200 nm的范圍內(nèi),有些病毒載體可能更大,如溶瘤病毒。病毒載體的粒徑越大,親和層析填料的動態(tài)結(jié)合載量 (DBC)越小,所以需要更大的-親和層析系統(tǒng)來進(jìn)行純化,這勢必會增加成本。

3. 病毒清洗和消毒的問題

病毒載體的敏感性、粒徑的可變性,在去除生物負(fù)荷這個問題上,也會產(chǎn)生不小的難度,因為一些用作親和層析填料的配基是蛋白質(zhì)或者肽,它們與在線滅菌 (SIP) 方案可能存在不兼容的地方。因此,病毒清洗和消毒對配基的選擇上的重要性不言而喻。

二、病毒載體的親和層析填料的商業(yè)化情況

1. 病毒載體的親和層析填料商業(yè)化的挑戰(zhàn)

病毒載體的親和層析填料商業(yè)化具有兩大挑戰(zhàn):一、目標(biāo)較大的產(chǎn)物可能會產(chǎn)生較低的產(chǎn)能。因為,目前的親和填料通常是為抗體的最佳工藝而設(shè)計的,粒徑大多在 10-15 nm左右,但是許多病毒載體的粒徑較大,如腺病毒為90-100nm、 γ - 逆轉(zhuǎn)錄病毒為80-100nm,根本無法進(jìn)入孔內(nèi)與基球進(jìn)行結(jié)合,導(dǎo)致產(chǎn)能降低。二、親和層析填料通常必須特定于某種病毒載體,對于 AAV ,還必須是特定的血清型(AAV2、AAV8、AAV9 等)。這就意味著這一類別的填料的應(yīng)用困難,病毒載體生產(chǎn)商很難使用單一親和層析填料為一系列載體構(gòu)建平臺純化工藝。

2. AAV親和層析填料商業(yè)化情況

目前,市面上的AAV親和層析填料的類型主要有: 血清特異型和非特異型。對于血清特異型,都需要進(jìn)行優(yōu)化和篩選,從而找到對血清特異型能很好地與親和配基結(jié)合的填料。

但是病毒載體的情況越來越復(fù)雜,就會存在與現(xiàn)有的親和配基不結(jié)合的情況。因此,親和層析填料的生廠商把眼光又轉(zhuǎn)移到了基于電荷的平臺化方法上來,這種方法能降低成本、兼容SIP和CIP工藝、跨血清型靈活。

三、AAV親和層析填料的新方案

英國Biotoolimics推出了針對AAV的親和層析填料:ViralPolishTM 5000B,該產(chǎn)品包含雙層瓊脂糖珠(含惰性外殼),孔徑大小受到嚴(yán)格控制,內(nèi)部多功能配體可快速高容量結(jié)合雜質(zhì)。ViralPolishTM 5000B親和層析填料專門為溫和洗脫條件下,AAV而設(shè)計,在不犧牲動態(tài)結(jié)合載量的情況下提高堿穩(wěn)定性。


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