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1. siRNA導入細胞的方法
siRNA導入細胞的方法有化學轉染技術、電穿孔法、磷酸鈣共沉淀技術、顯微注射和載體導入技術等。技術的選擇要考慮轉入時細胞的承受能力、細胞對病毒感染的敏感性、細胞生長特性等實驗條件的限制。對于貼壁細胞來講化學轉染技術比較合適，而對于懸浮細胞，電穿孔更有效。
2. 轉染試劑的選擇
在選擇轉染試劑時，首先考慮的是特定的細胞株，而不是被導入細胞中的物質。在試劑的選擇上建議選擇線性PEI轉染試劑。
3. 篩選轉染試劑
好的轉染試劑有以下特點：如下表
特性 | 程度 | 實例 |
毒性 | 小 | 對細胞的毒性小。 |
轉染率 | 高 | 在siRNA轉染過程中有較高成功率 |
導入效果 | 準確 | 在mRNA水平檢測siRNA導入的效果比用看家基因的siRNA陽性對照檢測更準確。 |
4. 細胞在轉染過程中死亡的處理方法
如果細胞在轉染后大多數(shù)死亡，那就說明轉染條件不適合細胞生存，需要進行進一步的優(yōu)化。在優(yōu)化轉染條件時需要考慮的因素：轉染試劑（線性PEI轉染試劑）和細胞特異性條件。例如：siRNA與轉染試劑的比例、轉染時間、細胞傳代數(shù)和細胞密度等。
5. 提高難以轉染的細胞轉染效率的方法以及轉染效率的確定
如何提高難轉染細胞的轉染效率是目前研究的一個技術難題。一般推薦使用電轉移法，該方法對細胞的損傷比較大，所以這種方法不太合適。熒光標記siRNA是熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡和流式細胞術常用的檢測轉染效率的方法。
6. 轉染后細胞死亡的原因及轉染條件的優(yōu)化
死亡原因 | 解決策略 | 如何優(yōu)化轉染條件：包括轉染前調整細胞密度、轉染濃度、檢測時間等。
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脂質體毒性 | 優(yōu)化轉染條件 | |
轉染濃度過高 | ||
轉染前的細胞狀態(tài)不佳 |
選擇像線性PEI轉染試劑這種毒性小的轉染試劑也可以達到優(yōu)化轉染條件的目的。另外，如果siRNA靶向的基因對維持細胞生長非常重要，那么細胞死亡的現(xiàn)象可能是由基因干擾。如果檢測受到細胞死亡的影響，可以適當調整檢測時間。
